單核巨噬細(xì)胞包括骨髓中的前單核細(xì)胞、外周血中的單核細(xì)胞、以及組織內(nèi)的巨噬細(xì)胞(Mφ)。Mφ來(lái)源于血液中的單核細(xì)胞,而單核細(xì)胞又來(lái)源于骨髓中的前體細(xì)胞。
操作方法:
(1)分離單核細(xì)胞,用Hanks液(pH7.2)調(diào)整為2~3×105細(xì)胞/ml;
(2)將趨化因子液25μl加入趨化小室的下室。將濾膜光澤的一面朝向趨化因子蓋在孔上,并將濾膜左上方剪去一小角;
(3)蓋上趨化小室的上室部分,用固定器夾緊;
(4)將單核細(xì)胞懸液50μl注入上室。操作時(shí)不能產(chǎn)生氣泡,因氣泡妨礙細(xì)胞的移動(dòng);
(5)各孔注入單核細(xì)胞懸液后,蓋以25mm×80mm的載玻片,覆蓋全部孔。在37℃,5%CO2溫箱中靜置90min誘導(dǎo)細(xì)胞趨化移動(dòng);
(6)從溫箱中取出多孔趨化小室;松開(kāi)固定器,將小室上、下倒置放在預(yù)先準(zhǔn)備好的紙墊上,取下濾膜;
(7)將事先切下一角的濾膜一邊用大鋏子固定,另一側(cè)用小鋏子夾好;
(8)將朝向單核細(xì)胞的濾膜面(即無(wú)光澤面朝下)浸入生理鹽水盤(pán)內(nèi),將大鋏子一邊的濾膜從液體中輕輕拉起(與容器呈30o角),即可將未移動(dòng)的細(xì)胞從濾膜上洗脫下來(lái);
(9)將濾膜光澤面朝上,貼在事先涂有蛋清甘油(甘油與蛋清等量混合而成)的載玻片(40mm×80mm)上,冷風(fēng)吹干濾膜后,用甲醇固定,進(jìn)行Giemsa或瑞氏染色;
單核巨噬細(xì)胞的副作用:
1、對(duì)本品過(guò)敏者禁用。有過(guò)敏傾向者,慎用。
2、發(fā)熱、骨痛、肌痛、頭痛、腹瀉、無(wú)力及皮疹等,亦偶有心律失常及呼吸困難等。
3、在化療和放療前后24小時(shí)內(nèi),不可使用本品。
4、本品可能是骨髓惡性腫瘤生長(zhǎng)因子,具有骨髓特征的惡性腫瘤病人應(yīng)慎用。
5、定期進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù),當(dāng)白細(xì)胞>50×109/L,中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)>20×109/L時(shí)應(yīng)停藥。
6、肝、腎功能不全、體液潴留者慎用。